EFECTO SINÉRGICO DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare A LA GENTAMICINA EN CULTIVOS DE Escherichia coli.
Synergic effect of Origanum vulgare essential oil to Gentamicin on Escherichia coli isolates.


Luis Chávez Torres 1, Flor de María Díaz Castañeda 1, Gisela Escalante Rosadio 1, Edgar Estrada Montañez 1.

1 Estudiante de Medicina Humana, Facultad de Medicina “Hipólito Unanue”, Universidad Nacional Federico Villareal, Lima, Perú.

RESUMEN


Objetivo: El presente trabajo tuvo como propósito determinar el efecto sinérgico antibacteriano entre el aceite esencial de Origanum vulgare y la Gentamicina en aislados de Escherichia coli. Diseño: Estudio experimental Lugar: Centro Latinoamericano de Enseñanza e Investigación en Bacteriología Alimentaria (CLEIBA) Participantes: Placas Petri conteniendo E. Coli ATCC 25922, aceite esencial de orégano y Gentamicina. Intervenciones: Se aplicó el método de Kirby Bauer (discos de difusión) en 20 placas Petri. Se aisló la cepa Escherichia coli ATCC 25922. El grupo Experimental fue tratado con discos de papel filtro, embebidos con Gentamicina y aceite esencial de orégano al 75%; mientras que el grupo Control, con discos de Gentamicina sola. Se realizó la medición de los halos y se registraron los datos. Principales medidas de resultados: Se evaluó el diámetro de los halos de inhibición Resultados: Los halos de inhibición del grupo Experimental resultaron 22,375 mm., mayores que los del grupo Control (20,75 mm). La prueba T determinó que la diferencia era estadísticamente significativa, p = 0,001 (p < 0,05). Conclusiones: Existe un efecto sinérgico antibacteriano in vitro entre el aceite esencial de Origanum vulgare y la gentamicina en E. coli.
Palabras clave: Aceite de orégano, Escherichia coli, Gentamicina, Sinergismo Farmacológico

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ABSTRACT


Objetive: The present research had as a purpose to determine the synergic antibacterial effect between Origanum vulgare (Oregano) essential oil and Gentamicin, on Eschecrichia coli isolates. Design: Experimental study Setting: Latin American Center of Education and Research on Alimentary Bacteriology. Subjects: Petri plates with E. Coli ATCC 25922, origanum essential oil and Gentamicin. Interventions: The diffusion discs method (Kirby Bauer) was used on 20 Petri plates. Escherichia coli ATCC 25922 strain was isolated. The Experimental group was treated with the filter papers discs that contained Gentamicin and origanum essential oil at 75%; and the Control group, with Gentamicin only. The inhibition halos were measured; and the data, registered. Main Outcome Measures: The diameter of the inhibition halos was measured. Results: The inhibition halos of the Experimental group resulted 22.375 mm, larger than the Control group (20.75 mm). The T test showed that it was a statistically significant difference, p = 0,001 (p < 0.05). Conclusions: There is a synergic antibacterial effect in vitro between Origanum vulgare essential oil and Gentamicin on Escherichia coli.
 Key words: Origanum oil, Escherichia coli, Gentamicin, Drug Synergism.


INTRODUCCIÓN


Actualmente las infecciones del tracto urinario, constituyen un problema de salud pública importante dado que se asocian a un incremento de la morbilidad, mortalidad y los costos hospitalarios para los pacientes, sus familias y la sociedad, siendo la Escherichia coli una de las principales bacterias causantes de esta realidad.(1-5) Por otra parte, el aceite y extracto de distintas plantas han sido utilizados para una diversidad de propósitos por miles de años. Esto se debe a su actividad antimicrobiana, siendo incluidos en procesos de conservación de alimentos, farmacológicos y tratamientos medicinales naturales. Esta propiedad fue estudiada por diversos investigadores, quienes señalan que el aceite esencial de diversas plantas, entre las que se encontraban el O. vulgare ssp., poseen actividad antimicrobiana frente a microorganismos Gram-negativos y Grampositivos.(6-12) Para ello se han empleado las técnicas in vitro dada la sencillez y reproducibilidad de las mismas. El orégano (Origanum vulgare) posee propiedades antioxidantes, antifúngicas, antiespasmódicas, antisépticas, y sobre todo se caracteriza por la potente acción de sus principios activos carvacrol y timol que le otorgan a esta planta un gran poder antibacteriano. (6,7) Por todo lo anterior, el objetivo principal del presente trabajo de investigación fue determinar si el aceite esencial de Origanum vulgare in vitro posee efecto potenciador sobre la acción antibacteriana de la gentamicina en cultivos de E. coli.


MATERIAL Y MÉTODO


El estudio fue de tipo prospectivo, transversal y experimental. Todos los procesos realizados en el laboratorio siguen las normas del “Manual de procedimientos Para la prueba de Sensibilidad Antimicrobiana” o bacteriana in Vitro del Instituto Nacional de Salud del Perú. (13) Para determinar el tamaño de la muestra, se realizo una prueba piloto con 10 placas Petri sometidos a la prueba de discos de sensibilidad, obteniendo una muestra de 20 placas. La Preparación del aceite esencial de orégano (Origanum vulgare) fue realizada en la facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Las hojas frescas de orégano (5Kg.) fueron trasladadas al tubo de extracción de un equipo para ser sometidas al proceso de destilación por arrastre de vapor de agua. (14) La bacteria E.coli ATCC 25922 fue obtenida de una muestra clínica en el Hospital Guillermo Almenara Irigoyen – EsSalud. Se realizó la reactivación de la cepa de E. coli en un tubo de ensayo con Agar Triptosa Soya (TSA) inclinado. Además, se prepararon placas petri con TSA mediante el método indicado, pero agregándosele polysorbate 80 (tween 80), que es un tensoactivo que permite la difusión de los aceites esenciales a través del agar, en la concentración de 5 mL por 1000 mL de TSA.(13) El tween 80 fue utilizado en todas las placas (casos y controles). Al cultivo de E. coli reactivado, se le añadió 2 mL de suero fisiológico y se agitó, hasta conseguir una suspensión. De esta suspensión se realizaron diluciones sucesivas de 10% cada vez, en caldo TSB, hasta conseguir una turbidez semejante a la del tubo N° 0,5 de la escala de McFarland, este tubo debe contener aproximadamente 1,5 x 108 ufc/mL. (15)
Se realizó el inoculo de E. coli, en las placas petri con Agar TSA mediante el método de hisopado en toda el área del medio. Se diluyó la Gentamicina de 80mg/2mL en solución Buffer N°3 hasta obtener una concentración de 2 mg/mL, de tal manera que cuando embebimos los discos con 5 μL de solución, estos contenían 10 μg de Gentamicina pura, que es la concentración establecida para antibiograma con Gentamicina. A esta concentración, la Gentamicina presenta un halo de inhibición mayor o igual a 15 mm de diámetro. (16) Se realizó el antibiograma mediante la técnica de Kirby Bauer (16) ; con discos de papel filtro embebidos con 5μL de Gentamicina preparada, (Grupo Control) y otro grupo con 5 μL de la Gentamicina y 5 μL de aceite esencial de orégano al 75% (Grupo Experimental). Se midieron los diámetros de los halos de inhibición de cada muestra con ayuda de una regla milimetrada. Los datos fueron recolectados y procesados en el programa SPSS versión 12.0 para Windows. El análisis estadístico se realizó mediante la prueba t para variables independientes, un p<0.05 se consideró estadísticamente significativo.


RESULTADOS


De la experiencia se obtiene que la media aritmética de los halos de inhibición del grupo experimental sea de 22,375 mm; mientras que los del grupo control resultó 20,75 mm. Figura 1.
El diámetro del halo de inhibición promedio del extracto de orégano asociado a gentamicina sobre cultivos de Escherichia Coli fue mayor al diámetro del halo promedio de Gentamicina sola. Ésta diferencia al evaluarse mediante la prueba t para variables independientes se concluyó que es estadísticamente significativa p=0,001 (p< 0,05).

Ver Tabla 1 


DISCUSIÓN


En el ensayo previo se comprobó el efecto antibacteriano del aceite esencial de Orégano contra E. coli, en una concentración del 75%. Este resultado coincide con un gran número de estudios (17-21) , en los cuales además de demostrar su efecto antibacteriano se ha determinado que los componentes más importantes que brindan la propiedad antibacteriana al orégano son Carvacrol y Timol. Estos componentes tienen la capacidad de destruir la estructura de la membrana celular, causando el incremento de su permeabilidad y por consiguiente la salida de iones inorgánicos, ATP, ácidos nucleicos y aminoácidos, etc. Incluso, se comprueba que el aceite esencial de Origanum vulgare tiene actividad antibacteriana contra otras bacterias gram-negativas como: Salmonella tiphymurium, Salmonella cholerae suis y Vibrio cholerae y las bacterias grampositivas: El sinergismo se habría dado por el mecanismo de sumación, debido a que ambas sustancias producen el efecto por mecanismos diferentes, y juntos dan como resultado un efecto mayor. (22) Entonces, se puede concluir que el aceite esencial del orégano (Origanum vulgare) al 75 % potencia la actividad antibacteriana de la gentamicina en cultivos de Escherichia coli. p = 0,001 (p < 0,05) Staphylococcus aureus y Bacillus cereus. (6,7)

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Correspondencia:
Edgar Estrada Montañez
Correo-e: sigfri3d@hotmail.com
Manuscrito recibido: Diciembre 2008
Aceptado para publicarse: Junio 2009